Klonowa immunoglobulina przeciwko lizoli-pidom w genomie szpiczaka czesc 4

Klonalna immunoglobulina u 17 z 20 pacjentów z chorobą Gauchera i u 6 z 6 myszy GBA1 – / – (które wiernie rekapitulują chorobę Gauchera typu u ludzi) 17 z gammapatią monoklonalną była specyficzna dla LGL1. Reaktywność LGL1 obserwowano również w przypadku poliklonalnej gammopatii związanej z chorobą Gauchera (Figura 1A). Przeciwnie, wykrywano jedynie niską lub reaktywność tła w próbkach pobranych od zdrowych dawców lub myszy kontrolnych. Aby pokazać zdolność LGL1 do pośredniczenia w aktywacji komórek B i komórek plazmatycznych w chorobie Gauchera in vivo, hiperimmunizowaliśmy młode myszy GBA1 – / – LGL1. Te myszy mają już nieco wyższy poziom komórek B Fas + GL7 + zarodka na linii podstawowej niż poziom u myszy kontrolnych (Figura 1C). Jednakże wstrzyknięcie LGL1 doprowadziło do dalszego wzrostu komórek B zarodka Fas + GL7 + zarodka (Figura 1C), jak również do wzrostu komórek plazmatycznych CD38 + CD138 + szpiku kostnego (Figura 1D i Fig. S1 w Dodatkowym Dodatku , dostępne z pełnym tekstem tego artykułu na). Continue reading “Klonowa immunoglobulina przeciwko lizoli-pidom w genomie szpiczaka czesc 4”

Klonowa immunoglobulina przeciwko lizoli-pidom w genomie szpiczaka cd

Siedem myszy z chorobą Gauchera otrzymywało dietę testową codziennie w dawce 150 mg na kilogram masy ciała, a siedem myszy z chorobą Gauchera, które pasowały do wieku i płci, otrzymywało dietę podstawową (dieta kontrolna). Zwierzęta otrzymywały przypisane diety przez 2 miesiące, a następnie zostały poddane eutanazji w celu pobrania tkanki i krwi. Analiza statystyczna
Kohorty pacjentów z chorobą Gauchera i sporadyczną gammapatią monoklonalną (MGUS lub szpiczak) i zdrowych dawców porównano z użyciem statystyk nieparametrycznych i obliczono wartości P. Dwustronne wartości P na poziomie alfa 0,05 uważano za wskazujące na istotność statystyczną. Dokładne testy Fishera i testy U Manna-Whitneya przeprowadzono przy użyciu oprogramowania Stata (StataCorp).
Wyniki
Klonalna immunoglobulina w chorobie Gauchera
Figura 1. Figura 1. Continue reading “Klonowa immunoglobulina przeciwko lizoli-pidom w genomie szpiczaka cd”

Klonowa immunoglobulina przeciwko lizoli-pidom w genomie szpiczaka ad

Żele do elektroforezy białek w surowicy nanoszono na błonę lipidową za pomocą zmodyfikowanej dyfuzji. Po zablokowaniu 1% BSA w detergencie PBS i Tween 20 membranę inkubowano z odpowiednim przeciwciałem wtórnym sprzężonym z peroksydazą chrzanową (HRP) i przemywano i opracowane przy użyciu chemiluminescencyjnego podłoża SuperSignal West Pico (Thermo Scientific). Test immunoenzymatyczny
Rozcieńczone ludzkie osocze (rozcieńczenie 1: 250) dodano do płytek pokrytych LGL1 (500 ng na studzienkę), a poziomy łańcuchów lekkich immunoglobuliny kappa i lambda określono za pomocą ludzkiego kappa- i lambda specyficznego enzymatycznego immunosorbentu. zestawy do oznaczania ilościowego w teście (ELISA) (Bethyl Laboratories) .15 Do pomiaru przeciwciał specyficznych względem lizozymu (HEL) i przeciwciał lipidowych (LGL1, DAG, kardiolipina i lipid A), płytki (płytka Nunc-Immuno, Thermo Scientific) były powlekane równomolowym stężeniem antygenów przez noc w temperaturze pokojowej, a następnie blokowane 1% BSA w PBS i Tween 20 detergentem przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Badaną surowicę i oczyszczoną próbkę immunoglobuliny rozcieńczono w 1% BSA w PBS i Tween 20 detergencie i inkubowano przez noc w 4 ° C. Przeciwciało swoiste dla antygenu wykrywano przez skoniugowane z HRP mysie i ludzkie immunoglobuliny, które opracowano z chromogenem TMB (3,3 , 5,5 -tetrametylobenzydyna, Invitrogen).
Ligand-Mediated Enrichment and Depletion of Clonal Immunoglobulin
Rozcieńczone ludzkie osocze (rozcieńczenie 1: 250) inkubowano z 50 mm3 perełek kontrolnych lub pokrytych sfingozyną (Echelon Biosciences). Continue reading “Klonowa immunoglobulina przeciwko lizoli-pidom w genomie szpiczaka ad”

Klonowa immunoglobulina przeciwko lizoli-pidom w genomie szpiczaka

Selekcja kierowana przez antygen jest zaangażowana w patogenezę monoklonalnych gammopatii. Pacjenci z chorobą Gauchera mają zwiększone ryzyko wystąpienia gammopatii monoklonalnych. Tutaj pokazujemy, że klonalna immunoglobulina u pacjentów z chorobą Gauchera i modelami mysimi gammopatii związanej z chorobą Gauchera jest reaktywna wobec lizo-glukozyloceramidu (LGL1), który jest znacząco podwyższony u tych pacjentów i myszy. Klonalna immunoglobulina w 33% sporadycznych ludzkich gammopatii monoklonalnych jest również specyficzna dla lizoli lipidów LGL1 i lizofosfatydylocholiny (LPC). Redukcja substratu łagodzi gammapatię związaną z chorobą Gauchera u myszy. Zatem długotrwała aktywacja immunologiczna przez lizoli- pidy może leżeć u podstaw zarówno gammopatii związanych z chorobą Gauchera, jak i niektórych sporadycznych gammopatii monoklonalnych.
Wprowadzenie
Szpiczak mnogi i gammapatia monoklonalna o nieokreślonym znaczeniu (MGUS) charakteryzują się klonalną ekspansją transformowanych komórek plazmatycznych.1 Analizy genów immunoglobulin w komórkach nowotworowych dostarczyły dowodów na selekcję opartą na antygenach, z ograniczonym zastosowaniem regionu zmiennego łańcucha ciężkiego i wysoce hipermutowaną geny łańcucha ciężkiego i lekkiego immunoglobuliny.2-6 Jednak antygeny leżące u podstaw początków większości MGUS i klonów szpiczaka pozostają nieznane. Continue reading “Klonowa immunoglobulina przeciwko lizoli-pidom w genomie szpiczaka”